En kvinna i 45-åldern omkom vid olyckan som skedde på väg 263 cirka en mil väster om Sigtuna, ungefär en halvmil söder om Skokloster. Kvinnan var bosatt i närområdet.
Vid 13-tiden på lördagen meddelade polisen att ytterligare en person har förolyckats i samband med olyckan. Det gäller en man i 20-årsåldern.
Anhöriga till de båda avlidna personerna har underrättats om dödsfallen.
En kvinna i 20-årsåldern har förts till sjukhus till följd av olyckan, men hennes skador ska inte vara allvarliga.
De båda fordonen frontalkrockade och det var förarna i respektive bil som omkom. Kvinnan som avled körde en hästtransport.
– Det verkar som om det ena fordonet kom över på fel sida av vägen. Det kommer att upprättas en anmälan om grovt vållande till annans död, uppger Daniel Wikdahl, presstalesperson för polisens Region Mitt.
Krocken inträffade vid åttatiden på lördagen på väg 263 mellan Enköping och Sigtuna vid sträckan mellan Varpsundet och Ekbacken i höjd med Vreta.